PUFA ω-3 处理缓解了亚硝酸钠引起的窝产仔数下降趋势。模型组胎儿成活率低于对照组;然而,PUFA ω-3 组的这一比率高于模型组。观察到雌性大鼠的比例没有显着差异。根据观察到的结果,亚硝酸钠暴露后胎儿的平均体重和脑重显着降低。与模型组相比,PUFA ω-3组胎儿平均体重和脑重显着增加。这些发现表明,在怀孕期间接触亚硝酸钠后,ω-3 可改善不良妊娠结局。
3. PUFA ω-3 减轻妊娠期亚硝酸钠暴露引起的胎儿脑损伤
进一步研究了PUFA ω-3对亚硝酸钠引起的脑组织损伤的影响。H&E染色显示对照组细胞排列紧密,细胞数量多,核圆形。模型组细胞组织松散,细胞间隙增加,细胞数量减少,部分细胞变长、拖尾,说明亚硝酸钠对大脑皮层细胞有破坏作用。与模型组相比,PUFA ω-3组细胞排列更紧密,细胞数量更多。
此外,为进一步研究PUFA ω-3的作用,通过IHC检测了紧密连接蛋白(OCLN 和 TJP1)。模型组OCLN和TJP1水平显着低于对照组。相比之下,PUFA ω-3组的OCLN和TJP1水平显着高于模型组。上述结果表明,PUFA ω-3可减轻胎儿脑损伤,并可降低妊娠期亚硝酸钠暴露引起的血脑屏障(BBB)功能。
4. PUFA ω-3 通过 NRF1/HMOX1 通路减轻亚硝酸钠暴露引起的胎鼠大脑皮质组织损伤
为进一步研究多不饱和脂肪酸(PUFA)ω-3对胎儿炎症的影响,检测了胎盘和大脑皮层组织的炎症因子。亚硝酸钠暴露增加胎盘组织TNF和IL-1B水平。PUFA ω-3组TNF和IL-1B浓度低于模型组。PUFA ω-3缓解了大脑皮层组织Tnf、Nos2和Il1b mRNA和蛋白表达水平的升高。转录因子SOX2在哺乳动物器官的早期发育中起着重要作用。采用IF法分析胎鼠大脑皮层SOX2、ENO2、TUBB3的表达。与模型组比较,PUFA ω-3组SOX2、ENO2、TUBB3表达显著增加。
其次,为进一步探讨PUFA ω-3的治疗机制,测量NRF1/HMOX1蛋白的表达,一个与氧化应激相关的经典途径。与模型组比较,PUFA ω-3上调Nrf1和Hmox1的表达。提示PUFA ω-3可通过NRF1/HMOX1通路减轻亚硝基钠暴露引起的胎鼠大脑皮层组织损伤。
5. PUFA ω-3 减轻妊娠期亚硝酸钠暴露引起的胎儿皮质组织线粒体损伤
用流式细胞仪检测线粒体功能。亚硝酸钠暴露增加了胎儿皮质组织的ROS和JC-1水平;添加PUFA ω-3后,这些物质水平降低。PUFA ω-3减轻了亚硝酸钠诱导的MDA浓度升高和SOD浓度降低。
与对照组相比,模型组复合物II、IV活性降低。
与模型组比较,PUFA ω-3组复合物II、复合物IV及ATP活性显著升高。
通过qRT-PCR分析线粒体mt-Co1基因的表达,结果显示亚硝酸钠暴露降低了mt-Co1 mRNA的表达。PUFA ω-3组mt-Co1 mRNA表达明显高于模型组
利用透射电镜(TEM)研究了PUFA ω-3对亚硝酸钠引起的线粒体氧化应激损伤的影响。与对照组相比,模型组线粒体数量减少,线粒体内部结构受损。与对照组相比,模型组线粒体膜模糊,线粒体结构严重受损。
值得注意的是,PUFA ω-3组线粒体损伤减轻。结果表明,PUFA ω-3可减轻亚硝酸钠暴露对胎儿皮质组织线粒体的损伤。